Варианты антигенов класса I у человека, по-видимому аналогичные мутант-ным формам класса I у мыши, были выявлены в функциональном тесте, основанном на цитотоксической реакции против инфицированных вирусом клеток. В этом тесте путем стимуляции in vitro аутологичными клетками, инфицированными вирусом, получают цитотоксические лимфоциты (ЦТЛ). Узнавание и лизис клеток-мишеней рестриктированы в такой системе двумя параметрами: используемой при иммунизации (примирующей) линией вируса и определенными антигенами HLA-A и HLA-B на клетках-респондерах. Иными словами, лизису будут подвержены лишь мишени, идентичные респондерам (ЦТЛ) по соответствующим антигенам HLA-A или HLA-B и инфицированные вирусом, использованным для примирования (т.е. тем же самым вирусом).Цитотоксические лимфоциты против вируса гриппа, рестриктирован-ные по HLA-A2, лизировали все инфицированные этим вирусом мишени HLA-A2, за одним исключением [11]. Резистентные к действию ЦТЛ клетки несли аллель HLArA2, продукт которого ...

Ввиду перечисленных трудностей на пути изучения молекул класса II человека представляется особенно замечательным успешное определение полной последовательности 198 аминокислотных остатков N-конца бета-цепи, В лабо-ратории Хилынмана [61] с помощью главным образом биохимических методов были осуществлены выделение и очистка альфа-и бета-цепей HLA-DR из лимфо-бластоидной линии клеток, полученных от донора, гомозиготного по HLA-Dw2!DR2. Хотя для антигенной характеристики выделенных продуктов не были использованы аллоиммунные сыворотки, эти продукты предположительно содержали молекулы HLA-DR. Молекулярные комплексы HLA-DR получали с помощью двуступенчатой процедуры, используя вначале ионообменную, а затем гель-фильтрационную хроматографию. Разделение альфа- и бета-цепей из комплексов HLA-DR проводили на колонке гидроксилапатита.Бета-цепь HLA-DR состоит из двух доменов, в каждом из которых имеется внутренний дисульфидный мостик. В этом отношении молекула напоминает молекулы МНС класса I и имм ...

В последнее время начинают появляться работы, посвященные описанию генов класса II, и сейчас мы уже имеем некоторые сведения о генах DR человека [73—75]. По всей вероятности, в изучении генов, кодирующих антигены класса II мыши и человека, в ближайшем будущем произойдет «информационный взрыв».

Ли и др. [74] выделяли мРНК из HLA-DR-положительной линии лимфо-бластоидных В-клеток человека, трансформированных вирусом Эпштейна— Барр. Фракцию мРНК, имеющую молекулы определенного размера, использовали для синтеза кДНК, которую затем встраивали в плазмиды. Был произведен отбор плазмид, способных гибридизироваться с мРНК, осуществляющей синтез продуктов DR в бесклеточной системе трансляции. Продукты HLA-DR преципитировали из системы трансляции с помощью гетерологичной антисыворотки против HLA-DR и определяли молекулярную массу транслированных белков в ДСН-ЭПАГ. В результате такого подхода исследователям удалось выделить два клона кДНК (pDR HI и pDR Н2), кодирующие тяжелую цеп ...

Как мы уже отмечали, область HLA-DIDR у человека пока еще изучена менее детально, чем область H-2I у мыши. Систему HLA-D определяют с по
мощью реакции в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ), в то время как HLA-DR определяют серологическими реакциями. Между аллелями 1—8 систем HLA-D и DR наблюдается сильная корреляция, но обнаруженные ассоциации не носят абсолютного характера, и при анализе представителей неевропеоидных рас возникают большие противоречия. Выявление подгрупп DR-подобных молекул с помощью аллоантисывороток и моноклональных антител также свидетельствует о сложной структуре этой области. До настоящего времени остается неизвестным число генов, кодирующих молекулы класса II, в пределах области HLA-DIDR. Пока еще не удалось точно охарактеризовать строго разграниченные субобласти, подобные субобластям в H-2I. Однако данные этого активно развивающегося направления исследований свидетельствуют в пользу существования таких субобластей. В реакциях с гомозиготными типирующими ...

К настоящему времени установлена полная первичная структура некоторых антигенов класса I мыши; кроме того, получено много данных о структуре целого ряда других белков этого класса. В одних случаях последовательности были определены в результате непосредственного анализа белков, в других — косвенным путем, по данным секвенирования соответствующих клонов ДНК. В табл. 14.2, представлены первичные структуры молекул H-2Kb, H-2Ld и HLA-B7. Структура Ld была определена сразу двумя путями — в результате секвенирования белка и на основе секвенирования ДНК. Если сравнивать цепи по гомологии доменов, наибольшая степень идентичности как между дву-;мя разными продуктами мыши, так и между белками мыши и человека характерна для третьего внеклеточного домена, а наименьшая степень гомологии — для трансмембранного участка. Заметим, что две мышиные цепи, изображенные i в таблице, отличаются друг от друга по длине (на 9 остатков с G-конца); кроме того, цепь Ld имеет делецию остатка метионина в пол ...

Установить точно функциональную роль трансплантационных антигенов класса I до сих пор не удалась. Однако известно, что эти антигены участвуют в качестве основных мишеней в реакции отторжения аллотрансплантата и, кроме того, служат распознаваемыми структурами при взаимодействии между цитолитическими Т-клетками и инфицированными вирусом клетками-мишенями. Изучение первичной структуры молекул класса I должно в своем максимальном варианте показать, каким образом эти молекулы осуществляют перечисленные иммунные функции. Кроме того, исследование этих структур может способствовать решению многих частных проблем. Так, изучение антигенов МНС, являющихся мембранными белками, может принести новые сведения о мембранных белках в целом — важной группе белков, о структуре которых известно очень мало. Необходимо также выяснить следующие вопросы: 1) суще-ствуют ли закономерные и предсказуемые различия между продуктами локусов класса I и 2) каким образом чрезвычайно высокий антигенный полиморфизм нах ...

Хотя до настоящего времени нельзя говорить о наличии абсолютных корре-ляций, можно констатировать, что продукты DR- и областей гомологичны друг другу в большей степени, чем продукты DR- и I-A-областей. Отмечена гомология между iV-концевыми последовательностями бета-цепи, закодированной в HLA-DR2, и бета-цепей, закодированных в других аллелях HLA-DR, а также гомология между этими последовательностями и последовательностями цепей Ер мыши. Гомология с Ар-цепями выражена минимальнопредставлены iV-концевые последовательности бета-цепей HLA-DR трех кле-точных линий и бета-цепей Ар и Ер мыши с гаплотипом к. iV-концевые после-довательности альфа-цепей человека также в большей степени гомологичны цепям Еа мыши, чем цепям Аа. Сравнение iV-концевых последовательностей альфа-цепей DR четырех клеточных линий с Еа- и Аа-цепями мыши гаплотипа к приведено в табл. 14.11. Данные секвенирования других молекул человека(кроме бета-цепи HLA-DR2) слишком ограничены и поэтому не могут быть использованы для ...

Различия функций, определяемых антигенами класса I и II, как и рас-пределение их на клетках и в тканях, изучены довольно хорошо. Функциональные различия отражаются в структурных различиях основных субъединицантигенов класса I и II (рис. 14.2). Антигены класса III отличаются от антигенов класса I и II не только совершенно иной молекулярной массой и структурой полипептидных субъединиц, но и по распределению в организме: антигены класса III присутствуют в сыворотке, на мембране лимфоцитов их нет,
На рис. 14.2 схематически изображены комплекс Н-2 мыши и кодируемые в его пределах продукты. Антигены класса I, обозначенные К, D и L, называют также классическими трансплантационными антигенами, их аналогами у человека являются антигены HLA-A, В и С [11 — 15]. Дополнительные антигены класса I, кодируемые в тимус-лейкозной (TL) области, обнаруживаются лишь
на некоторых типах дифференцированных клеток иммунной системы [12, 16— 20]. Этим они отличаются от К, D и L, расп ...

Изучению структуры мышиных антигенов класса I в большой степени способствовала возможность получения аллоантисывороток против частных специфичностей этих антигенов. Наличие таких антисывороток давало возможность, вводя радиоактивную метку в линии клеток или в культивируемые клетки селезенки, получать из клеточных лизатов путем одно- или двухэтапной процедуры белковые молекулы определенной антигенной специфичности. Такие методы специфической иммунопреципитации использовались в ранних исследованиях, в которых сравнение различных антигенов класса I проводилось методом пептидных карт [76]. В этих работах впервые были выявлены большие структурные различия как между продуктами разных аллелей Н-2, так и между продуктами разных сцепленных локусов. Эти наблюдения расширили представления о полиморфизме в данной системе, поскольку оказалось, что речь идет не только о наличии большого числа различных аллельных продуктов, но и о значительных структурных различиях между ними. А ...

Первые работы по изучению генов класса I включали в себя выделение мРНК из клеток, образующих соответствующий антиген, и различные процедуры фракционирования РНК для получения обогащенной фракции, ответственной за синтез конкретных молекул класса I. Разделение контролировали, осуществляя трансляцию мРНК в системах бесклеточного синтеза белка и определяя искомый белок в смеси продуктов трансляции. Препарат, в достаточной степени обогащенный определенной мРНК, использовали для синтеза кДНК, которую встраивали в плазмиды и размножали в бактерии Escherichia coli. Имея библиотеку таких клонированных сегментов кДНК, можно затем проводить их скрининг по способности гибридизоваться с мРНК, ответственной за синтез антигена МНС. Скрининг может быть основан на ингибировании трансляции или на положительной селекции мРНК с помощью клонов кДНК. После выявления соответствующего клона встроенную ДНК «вырезают» из плазмиды и определяют ее последовательность. Последовательность ДНК в пределах тако ...