Хотя р2т является составной частью структур белков класса I у человека и мыши, кодирующие его гены расположены вне области МНС. В случае $2т человека не выявлено генетического полиморфизма. С помощью методов гибри-дизации соматических клеток ген $2т человека был локализован в хромосоме 15, а не в хромосоме 6, несущей гены МНС. Было показано, что белок f52m мыши имеет генетически детерминированный диморфизм, обусловливающий замещение одной аминокислоты в положении 85; наличие диморфизма позволило картировать ген $2т мыши. В результате этих исследований ген |32т мыши ; был локализован в хромосоме 2, в то время как гены МНС мыши расположены в хромосоме 17.
К настоящему времени полностью установлена первичная структура г некоторых антигенов класса I человека и мыпнзц Как уже отмечалось, методы определения структуры этих продуктов были разработаны лишь недавно, и по | большей части они представляют собой отступление от классической методологии. Тем не менее исследование первого ...

Методика перекрестной трансплантации между родителями и потомством позволила выявить ряд мутантов, возникших в инбредных линиях мышей. 17 из 26 выявленных к настоящему времени спонтанных мутаций были картированы в гене Н-2КЪ. В результате было постулировано, что этот ген является самым мутабельным из известных генов млекопитающих. Определение полной первичной структуры молекулы Кь позволило детально исследовать мутантные продукты путем сравнительного структурного анализа.

В исследованиях, обеспечивших расшифровку структуры Кь, молекулу обрабатывали бромцианом (CNBr), под действием которого происходит рас-щепление пептидной цепи по остатку метионина со стороны С-конца. Бромциа-новые пептиды разделяли гель-фильтрацией и определяли их структуру путем секвенирования N-концевых последовательностей и дальнейшего расщепления на более мелкие пептиды с помощью протеолитических ферментов. При изучении структуры мутантов Кь Нэирн и др. [53 получали бромциановые пептиды и сравнива ...

Технология, основанная на использовании рекомбинантной ДНК, явилась новым могучим орудием при исследовании мультигенных семейств, таких, как МНС. Использование клонированных сегментов ДНК, кодирующих антигены МНС, позволит разрабатывать фундаментальные проблемы, неразрешимые в рамках серологической и структурно-биохимической методологии, такие, например, как определение числа генов МНС, особенности их организации и экспрессии. Кроме того, возможность реэкспрессии клонированных генов в новых клетках-хозяевах открывает перспективы функционального изучения индивидуальных МНС-продуктов на качественно новом уровне. ...

Серологические методы изучения антигенов МНС известны уже давно.
Кроме того, используя антисыворотки против различных специфических белков МНС, можно усиливать или подавлять определенные функции иммунитета, что дает возможность изучать функциональную роль различных специфичностей. Поскольку все эти методы дают возможность проводить анализ на микроанали-тическом уровне, они не требуют выделения молекул антигена. Однако при попытках структурного анализа антигенов МНС возникают новые трудности, связанные с двумя особенностями этих антигенов.

Первая из них — это сравнительно низкое количество доступного для работы материала. Так, концентрация антигенов равна примерно 5«105 молекул на лимфоидную клетку (содержание антигенов на других клетках значительно ниже). Если принять, что выход выделяемого продукта составляет 20%, то для получения 5 мг молекул с мол. массой 50 000 потребуется 1012 клеток. Это соответствует примерно 1 кг клеток; для выращивания такого кол ...

Как уже было отмечено, МНС человека содержит три локуса, А, В, С, кодирующие главные трансплантационные антигены. По серологическим данным продукт локуса А имеет около 20 аллельных вариантов, продукты локуса В — 40 вариантов и локуса С — 8 вариантов. Первоначальные структурные }: исследования антигенов HLA принесли лишь ограниченную информацию о N-концевых участках этих молекул. Наиболее полные данные о первичной структуре были получены в результате двух различных подходов. Строминжер и др. [141 получили линию клеток от донора, гомозиготного по локусам А к В. Было показано, что эта линия клеток продуцирует молекулы класса I в очень высоких количествах. Клетки культивировали в условиях, обеспечивающих накопление большой биомассы. Затем из препаратов мембран биохимическими методами выделяли два антигена, А2 и В7. Трагард и др. [15] пошли по другому пути. Они брали трупные селезенки (независимо от ЯХЛ-гаплотипа доноров), выделяли из них пул антигенов класса I и использовали его для стру ...

Было показано, что гены, кодируемые в области H-2I, играют решающую | роль в осуществлении множества иммунных функций, в том числе в способности I реагировать на антиген и осуществлять супрессию иммунного ответа; эти гены I определяют целый ряд взаимодействий Т-лимфоцитов с В-лимфоцитами и мак-1 рофагами. Кроме того, было установлено, что генетический контроль реакции! в смешанной культуре лимфоцитов (CKJ1) и реакции «трансплантат против | хозяина» (РТПХ) осуществляется у мыши генами области /. Сходные функции I были картированы в гомологичной области HLA-D/DR человека. Оказалось Iтакже, что эта область связана с предрасположенностью к некоторым заболе-ваниям и патологическим состояниям. Очевидно, что генетическая гетероген-ность человеческих популяций и этические ограничения экспериментов на чело-веке создают трудности для получения такой детальной информации об области HLA-D/DR, которая имеется для области / у мыши.

Единственные продукты областей H-2I и HLA-D/DR, ох ...

Еще на ранних этапах изучения структуры рат сразу несколько групп исследователей отметили бросающееся в глаза сходство между этой легкойцепью антигенов гистосовместимости и определенными молекулами иммуно глобулинов. В результате поиска гомологии р2т с известными последователь ностями пептидных цепей иммуноглобулинов было замечено, что р2т имеет наибольшую гомологию с доменом СН3 молекулы IgG. Хотя степень гомологии первичной структуры между (52т и доменом константной области иммуноглобулина составляет лишь 28%, что само по себе не так уж много, существуют другие, гораздо более яркие черты сходства между этими молекулами. Было обнаружено, что из 11 положений, в которых домены константных областей всех иммуноглобулинов имеют идентичные аминокислотные остатки, р2т идентичен иммуноглобулинам по 10 положениям. Более того, в идентичных положениях имеются такие редкие для молекул иммуноглобулинов аминокислотные остатки, как Cys, His и Тгр. Расчеты, сделанные на основе всей изв ...

Субпопуляции молекул класса II идентифицировали с помощью аллоанти-сывороток и моноклональных антител. В некоторых случаях анализ включал в себя последовательную иммунопреципитацию, в других — сравнивали результаты двумерного электрофореза в геле молекул, преципитированных алло-антисыворотками или моноклональными антителами разной специфичности. Большинство молекул класса II можно осадить из лизата клеток с помощью аллоантисывороток против HLA-DR.

Первые сведения о молекулах класса II, отличных от HLA-DR, были получены при использовании антисывороток против специфичности, обозна-ченной DC1. Впоследствии оказалось, что антисыворотки МВ1, МТ1 и LB12 проявляют такой же характер цитотоксичности и осаждают из клеточных лиза-тов такие же молекулы, как и антисыворотка DC1. Преципитируемые этими сыворотками альфа- и бета-цепи отличаются от цепей, преципитируемых анти-DR-сыворотками. Кроме того, было показано, что молекулы, реагирующие с сывороткой DC1, чувствительны к ограничен ...

Помимо продуктов класса I, кодируемых в локусах К, Z), L и R мыши и локусах А, В и С человека, существует другая группа антигенов, удовлетво-ряющих определению молекул класса I. У мыши есть группа генов, локализо-ванных в хромосоме 17 теломерно по отношению к комплексу Н-2 эти гены кодируют продукты класса I, обозначенные Qa-1, Qa-2 и TL. Как было показано, продукты этой области, получившей название Tla, сходны с продуктами класса I областей К и D в том отношении, что имеют такую же субъединичную структуру: р2т и тяжелую цепь — гликопротеин с мол. массой около 45 000. Продукты области Tla имеют более ограниченное распределение по тканям, чем продукты генов областей К и D; функциональная роль этих продуктов не известна.

Данные о том, что молекулы класса I области Tla по субъединичному составу в принципе аналогичны молекулам области К и D, были единственными сведениями о структуре этих молекул, пока Солоски и др. [19] не получили антигены Qa в количествах, достаточных д ...

Сравнительное изучение альфа- и бета-цепей класса II у человека путем анализа триптичвских пептидов проводили в нескольких лабораториях. В этих исследованиях использовали разные методы разделения пептидов и разные радиоактивно меченные аминокислоты. Во всех случаях для получения пре-паратов альфа- и бета-цепей молекулы фракционировали по размерам в ДСН-ЭПАГ. Хотя, согласно большинству работ, бета-цепь более полиморфна, была выявлена также гетерогенность пептидов альфа-цепей. Поскольку в гомозиготной линии клеток было обнаружено семь вариантов бета-цепей (табл. 14.9), то вполне возможно, что использование для разделения цепей других методов, основанных не на различии размеров, приведет к иным результатам.

Антигены класса II клеточных линий, гомозиготных по HLA-DR, исследовали с помощью двумерного электрофореза в геле. Как и в случае антигенов класса II мыши, распределение имело сложный характер и состояло из нескольких «пятен» альфа- и бета-цепей. Две независимые групп ...