Методика перекрестной трансплантации между родителями и потомством позволила выявить ряд мутантов, возникших в инбредных линиях мышей. 17 из 26 выявленных к настоящему времени спонтанных мутаций были картированы в гене Н-2КЪ. В результате было постулировано, что этот ген является самым мутабельным из известных генов млекопитающих. Определение полной первичной структуры молекулы Кь позволило детально исследовать мутантные продукты путем сравнительного структурного анализа.

В исследованиях, обеспечивших расшифровку структуры Кь, молекулу обрабатывали бромцианом (CNBr), под действием которого происходит рас-щепление пептидной цепи по остатку метионина со стороны С-конца. Бромциа-новые пептиды разделяли гель-фильтрацией и определяли их структуру путем секвенирования N-концевых последовательностей и дальнейшего расщепления на более мелкие пептиды с помощью протеолитических ферментов. При изучении структуры мутантов Кь Нэирн и др. [53 получали бромциановые пептиды и сравнивали их с аналогичными пептидами «родительской» молекулы, используя карты триптических пептидов, полученные методом ионообменной хроматографии. Такая технология позволяет точно локализовать имеющиеся различия, не проводя дополнительной работы по определению полной последовательности каждой мутантной молекулы. Поскольку при картировании использовали триптические пептиды, в молекулу предварительно вводили радио-активную метку по аргинину и лизину. Кроме того, в качестве метки использо-вали радиоактивный метионин, так как каждый бромциановый пептид должен после обработки трипсином оканчиваться метионином на С-конце. Зная характер распределения пептидов, получаемых при обработке «родительской» молекулы Н-2КЬ, можно было указать точную локализацию пептидов, отсутствующих или измененных в мутантной молекуле. Анализу такого рода были подвергнуты 10 различных мутантных молекул. Полученные результаты суммированы на рис. 14.5 и в табл. 14.5. Любой мутант отличается от «родительской» молекулы не более чем по двум аминокислотам; все мутации сосредоточены в N-концевой части молекулы. Некоторые мутанты имеют замены в одинаковых положениях. Анализ полученных результатов не свидетельствует в пользу сдвига рамки считывания или появления нонсенс-мутаций; большинство изменений, найденных у мутантов Н-2КЬ, ближе всего соответствуют категории точковых мутаций. Исключение составляет мутация КЪт1, при которой каждая из двух аминокислотных замен обусловлена заменой двух оснований в соответствующих нуклеотидных триплетах. Все прочие известные замены аминокислот соответствуют единичным заменам нуклеотидных оснований.

Как уже отмечалось, перечисленные мутации были обнаружены в тесте отторжения трансплантата кожи. Помимо этого у ряда мутантных линий были
найдены значительные различия в других иммунных функциях, осуществляв- * мых антигенами класса I, например в способности антигенов функционировать в качестве мишеней для цитотоксических лимфоцитов. Хотя были получены моноклональные антитела, избирательно реагирующие с разными мутантамиследует подчеркнуть, что, как правило, мутантные варианты не удается диффе-ренцировать стандартными серологическими реагентами, используемыми для типирования Н-2. Таким образом, минимальные изменения первичной струк- I туры, не выявляемые обычными серологическими методами, могут вызывать значительные изменения биологической активности молекул.