Рекомбинации в пределах локуса МНС.

Как видно из рис. 13.6, получение каждого последующего поколения по приведенной схеме включает в себя скрещивание гетерозигот по локусу Н-2. При размножении гетерозигот всегда может произойти рекомбинация между аутосомами и в мейозе. В процессе создания конгенной линии такие рекомбинации могут уменьшить количество вносимой с Н-2 генетической информации, сцепленной с этим локусом. Поэтому, чем больше возвратных скрещиваний (бэккроссов) проведено при получении конгенной линии, тем ближе к локусу Н-2 будут прилегать границы, за пределами которых хромосома ревертировала в нужном направлении, т. е. в сторону той линии, из которой происходит базовый генотип. Однако МНС сам по себе состоит из множества генов, и поэтому при таких скрещиваниях могут также возникать рекомбинации в пределах локуса Н-2. Именно благодаря выявлению и характеристике таких рекомбинантов была создана карта сцепления Н-2. Рассмотрим теперь, каким образом осуществляется выявление таких рекомбинантов и их использование при анализе тонкой генетической структуры локуса Н-2.
Для выявления рекомбинации необходимо проанализировать потомство интеркросса или бэккросса, учитывая сразу несколько характерных для МНС параметров. Дело в том, что уловить факт рекомбинации можно лишь в том случае, если сочетание каких-либо двух параметров проявляется в потомстве иначе, чем у родителей. Так, в процессе создания КР-линии А.В (обозначения условные) может, например, произойти рекомбинация, показанная на рис. 13.7. Предположим, что потомство анализируют по таким свойствам, как а) энергичное
отторжение трансплантата кожи линии А (т. е. генотип bb локуса гистосовме-стимости) и б) экспрессия на лимфоцитах продуктов генов а или Ь, выявляемая в комплементзависимом цитотоксическом тесте. При этом для определения продуктов bb используются сыворотки А-анти-В и для определения продуктов аа — сыворотки В-анти-А.

Как показано на рис. 13.7, в результате рекомбинации в пределах локуса Н-2 может получиться особь, типируемая как bb по тесту трансплантации кожи (ввиду наличия фрагмента комплекса Н-2, ответственного за отторжение трансплантата), но в то же время типируемая серологически как ab (поскольку клетки этой особи реагируют как с сывороткой А-анти-В, так и с сывороткой В-анти-А). Очевидно, такое животное не удовлетворяет требованиям, предъявляемым к конгеннои линии, и его не следует использовать далее при выведении такой линии. Однако именно это животное предположительно является реком-бинантом, и в результате возвратных скрещиваний (бэккросов) с линией А оно может дать начало конгеннои рекомбинантной линии, которая будет названа A.B(IR). Линия, полученная с использованием следующего выявленного рекомбинанта, получит название A.B(2R). Таким путем можно вывести серию конгенных линий, каждая из которых будет отличаться от «основной» линии А по локусу МНС. Линии будут также различаться между собой, поскольку рекомбинации в пределах МНС могут происходить в различных точках этого локуса.

К счастью, исследователи, занимавшиеся генетикой мыши, представляли себе возможность таких рекомбинаций и не выбраковывали рекомбинантов,
получавшихся при создании #-?-конгенных линий. В результате в настоящее время имеется серия рекомбинантных линий между линиями C57BL/10 (Н~2Ъ) и A/WySn (Н-2а). Эту серию получил Стимпфлинг (Stimpfling) при создании КР-линии В10.А; анализ рекомбинантов принес большую информацию о тонкой генетической структуре локуса Н-2 [23]. Так, линии B10.A(2R) и B10.A(4R) были использованы для картирования ряда генов иммунного ответа в пределахМНС, а эксперименты с линиями B10.A(3R) и B10.A(5R) позволили выявить область /-/. Разнообразие интра-//-2-рекомбинантов на примере конгенных рекомбинантных линий В10.А отражено на рис. 13.8. В табл. 13.7 приведены данные о многих широко используемых конгенных рекомбинантных линиях и указаны известные или предполагаемые участки рекомбинации. Чтобы понять терминологию, используемую в этой таблице для обозначения рекомбинантных гаплотипов, необходимо ознакомиться со следующим разделом настоящей главы, где карта локуса Н~2 рассматривается более детально.

Конгенные линии поддерживают, как правило, последовательным инбри-дингом. Как следует из сказанного в начале настоящей главы, эти линии под-вержены такому же генетическому дрейфу, как и любые другие сублинии инбредных мышей. Так, хотя исходно линии В10 и В10.А различались только по локусу МНС, в базовом генотипе обеих линий накопилось и фиксировалось множество мутаций, так что эти линии уже отличаются не только по Н-2, но и по базовому генотипу. Во избежание влияния дрейфа генов из базового генотипа на результаты экспериментов некоторые лаборатории время от времени скрещивают конгенных животных с родительской линией (бэккроссы) и между собой (интеркроссы) и из потомства интеркроссов вновь отбирают особей, гомозиготных по локусу Н-2 для дальнейшего инбридинга. В колонии автора этих строк такие скрещивания проводят через каждые 6—10 поколений. Эта процедура не предотвращает дрейфа от исходного базового генотипа, но позволяет поддерживать в пределах конкретной колонии постоянный набор базовой информации у всех вариантов, конгенных по базовому генотипу.