Эксперименты по комплементзависимой цитотоксичности и иммунофлуорес-ценции с использованием антисывороток против Н-2 показали, что аллельное исключение молекул Н-2К и D не происходит в Т-клетках гибридов F^ Следо- ;вательно, в рамках модели взаимодействия подобных структур (CI) молекулы Н-2К и D не могут быть теми молекулами, которые обеспечивают клеточное взаимодействие. Тогда молекулы GI должны кодироваться тесно сцепленными генами, что вполне возможно, поскольку исходное генетическое картирование проводилось на рекомбинантных мышах. С помощью таких рекомбинантов можно установить только область определенной хромосомы. Очевидно, что в каждой области и субобласти может находиться несколько генов. Следова-] тельно, для идентификации молекул МНС, распознаваемых цитотоксическими Т-лимфоцитами, требовались другие подходы.

Первый подход сводится к использованию антисывороток против молекул К и D для подавления опосредованной Т-лимфоцитами цитотоксичности. Резуль-таты подобного опыта приведены в табл. 15.7. Хотя эти данные убедительно

свидетельствуют о том, что распознавание молекул К и D — условие, необходимое для функционирования цитотоксических Т-лимфоцитов, для окончательного вывода они все же недостаточны. Одна проблема состоит в том, что анти-сыворотки к продуктам К- и .D-областей получены с использованием тех же рекомбинантных линий мышей, о которых говорилось выше. Поливалентная антисыворотка могла содержать антитела к продуктам нескольких генов, коди-руемых одной и той же областью. Это возражение в настоящее время снято в результате использования моноклональных антител против Н-2К и D. Однако вторая проблема в интерпретации опытов по подавлению цитотоксичности не i была решена. Так, не исключена возможность, что молекулы Н-2К и D тесно ассоциированы на поверхности клетки с генетически и структурно различными молекулами клеточных взаимодействий и что последние стерически экранируются антителами, направленными против Н-2К и D.
При изучении линий мышей с #-?йГь-мутациями были поставлены более четкие эксперименты для определения продукта гена Н-2К как рестрикти-рующего элемента, т. е. закодированного в МНС гликопротеина, который распознают цитотоксические Т-лимфоциты в сочетании с антигеном. Структурные исследования молекулы Кь свидетельствуют о том, что мутации привели

В последнее время для окончательного подтверждения роли молекул клас са I как рестриктирующих элементов используются молекулярно-биологические методы клонирования и трансфекции генов. Так, например, инфицированные вирусом везикулярного стоматита (ВВС) L-клетки мышей (Н-2к), в которые бш трансфецирован геномный клон, содержащий ген H-2Ld, служили мишенямн для BBC-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов мышей двух различных линий с гаплотипом Н-21. Этот цитотоксический эффект специфически подав> ляется моноклональными антителами против молекул H-2Ld, но не монокло нальными антителами против молекул H-2Dd. Т-лимфоциты не лизировалЕ ложно трансформированные клетки, которые не экспрессируют продукт гена H-2Ld. Этими экспериментами Форман и др. [14] продемонстрировали отчетливо, что для осуществления литической функции цитотоксических Т-лимфоциш на клетках-мишенях должен быть экспрессирован продукт именно гена H-2J} в дополнение к антигенам вируса везикулярного стоматита.

Эксперименты с использованием мутантов и переносом генов показали что молекулы класса I являются рестриктирующими элементами, распозна ваемыми цитотоксическими Т-лимфоцитами. Учитывая это, можно теперь вер нуться к экспериментам по положительной селекции клеток F1? описаннык в табл. 15.6, и убедиться, что результаты этих опытов нельзя объяснить аллель ным исключением структур клеточных взаимодействий. Это связано с тем, т такими структурами клеток-мишеней являются молекулы МНС класса 1, аллельные варианты которых кодоминантно экспрессированы на отвечающй

популяции Т-лимфоцитов гибридов Fx. Следовательно, наиболее вероятная интерпретация этих результатов заключается в существовании в популяции отвечающих клеток Fx двух независимых субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов, каждая из которых специфична к вирусу в ассоциации с моле-кулами МНС одного из родителей.