Как правило, очень легко вызвать толерантность с помощью таких немета-болизируемых антигенов, построенных из повторяющихся единиц, как полисахариды. Доза Т-независимых антигенов, слегка превышающая иммуногенную, часто приводит к длительному и глубокому состоянию ареактивности. Нерегулярные линейные сополимеры, состоящие исключительно из ?>-аминокислотг по-видимому, — более эффективные толерогены, чем соответствующие полимеры L-аминокислот [60]. Кривые зависимости доза — ответ для полимеров D-аминокислот и полисахаридов сходны. Увеличение дозы этих молекул свыше дозы, оптимальной для иммунизации, развивает ареактивность. В целом относительно легко вызвать толерантность к растворимым белкам, хотя для этого может потребоваться применение цитотоксических лекарственных препаратов, удаление иммуногенного материала из препарата или использование незрелых животных. Как правило, очень трудно вызвать полную толерантность к вирусным антигенам, однако случаи частичной ареактивности описаны [61—64]. Аналогично обстоит дело с гетерологичными эритроцитами. Хотя в последнее время и появились многочисленные сообщения о выработке к ним толерантности, ареактивность обычно является лишь частичной и быстро сходит на нет, когда введение антигена прекращается.

Классические эксперименты Дрессера [34, 65—69] отчетливо указывают на то, что физические свойства антигена могут влиять на его способность индуцировать толерантность или иммунитет. Изучая индукцию толерантности у взрослых мышей на гетерологичный гамма-глобулин, Дрессер заметил, что ультрацентрифугирование (30 мин при 20 000—30 000 об/мин) позволяет разде-лить антиген на две фракции: 1) растворимую, преимущественно мономолеку-лярную, дисперсную, легко вызывающую толерантность в относительно низких дозах (10—200 мкг) и 2) агрегированную фракцию, не индуцирующую толе-рантности, но, напротив, стимулирующую иммунный ответ. Ряд других иссле-дователей также сообщили об индукции толерантности белками, подвергнутыми ультрацентрифугированию [70—75]. Аналогичное разделение антигена на им-муногенный и толерогенный компоненты можно осуществлять с помощью и солевого фракционирования, и гель-фильтрации [42, 76]. Таким образом, в некото-рых случаях индивидуальный антигенный белок можно разделить физическими методами на иммуногенный и толерогенный компоненты. In vivo разделение гетерологичного альбумина на иммуногенную и толерогенную фракции осуще-ствили Фрей и др. [76, 77], использовавшие очистку фагоцитозом («биологическая фильтрация»). Сравнительно медленно фагоцитируемая часть антигенного препарата является высокотолерогенной, в то время как быстро фагоцитируемая часть предположительно иммуногенна. Аналогичное фракционирование гамма-глобулина человека (ЧГГ) in vivo провели Голуб и Уэйгл [42]. Очевидно, быстро фагоцитируемые компоненты соответствуют агрегированной иммуногенной фракции Дрессера, а медленно фагоцитируемый материал — неагрегированной толерогенной фракции. Некоторые исследователи показали, что можно получить толерогенныи препарат, удалив с помощью «биологической фильтрации» in vitro иммуногенный материал из образца антигена [78]. В случае разных линий эффективность «биологической фильтрации» in vitro различна. Таким образом, ясно, что удаление агрегированного материала из препарата антигена с помощью ультрацентрифугирования наиболее просто и практически доступно для получения высокотолерогенного материала. Не следует, однако, забывать, что препарат агрегированного антигена также может в некоторых случаях вызывать ареактивность под действием, возможно, других механизмов [79—80]. Кроме того, из правила «медленно фагоцитируемая фракция — лучший толероген» есть исключения. Малые количества пневмококкового полисахарида, все еще выявляющиеся в крови мыши через несколько недель после введения антигена, неотличимы от исходного антигенного препарата по способности вызывать иммунитет и толерантность [81].

Существует общая закономерность: уменьшение молекулярной массы анти-гена при сохранении антигенной специфичности приводит к снижению его спо-собности индуцировать иммунный ответ и повышает его толерогенную активность. Полимеризованный флагеллин (104 кДа), мономерный флагеллин (40 кДа) и фрагмент А мономера флагеллина (18 кДа) представляют собой серию из трех компонентов, очевидно содержащих идентичные антигенные детерминанты. По мере уменьшения молекулярной массы наблюдается ослабление им-муногенных и усиление толерогенных свойств [82—85J. Влияние уменьшения длины полимерных молекул исследовано в случае левана [86, 87], полисахарида пневмококка типа III [88] и поливинилпирролидона [89]. В каждом случае иммуногенность падала с уменьшением молекулярной массы. При значениях меньше 10 кДа соединения переставали проявлять иммуногенные свойства. Низкомолекулярные неиммуногенные препараты левана и поливинилпирролидона сохраняли способность легко индуцировать толерантность. Напротив, уменьшение молекулярной массы SIII путем деградации приводило одновременно к потере и толерогенности, и иммуногенности. Это различие, вероятно, связано с различиями в механизмах индукции толерантности под действием данных антигенов.

Что касается минимальных размеров антигена, способного индуцировать толерантность, то Морено и Хэйл [87] установили, что способность линейного фруктозана ({32 —>- 6) индуцировать толерантность теряется в интервале мол. массы 5000—1500. Химически инертные гаптены обычно неэффективны в качестве индукторов толерантности in vivo [30, 90], тем не менее существует предположение о возможности индуцировать толерантность такими гаптенами [91— 94J. Например, при введении новорожденным или взрослым морским свинкам моновалентного конъюгата азобензиларсоната с N-ацетилтирозином подавляется развитие гиперчувствительности замедленного типа, возникающей после введения поливалентного азобензилнарсоната, сшитого с политирозином в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ). Аналогично толерантность к NNP может быть вызвана введением неактивного гаптена NNP, связанного с е-амино-м-капро-новой кислотой (ЕАКК). Интересно отметить, что, хотя мыши, получившие NNP — ЕАКК, и оказываются ареактивными, при разрешающем введении им NNP-лошадиных эритроцитов in vivo их спленоциты in vitro дают нормальный иммунный ответ. Создается впечатление, что состояние ареактивности легко-обратимо. Следует отметить, что, когда толерантность индуцируется химически активной формой того же гаптена (NNP-азид), клетки селезенки остаются аре-активными in vitro что указывает на различия в механизмах этого явления. Таким образом, в некоторых исключительных случаях состояние ареактивности
может быть индуцировано низкомолекулярным моновалентным гаптеном, хотя и не известно, остается ли гаптен в моновалентном состоянии in vivo.

Было продемонстрировано решающее значение плотности эпитопов для способности Т-независимых антигенов индуцировать толерантность. Как правило, увеличение плотности эпитопов повышает толерогенность препарата антигена и в некоторых случаях уменьшает его иммуногенность. В случае использования конъюгатов пороговое значение плотности эпитопов для индукции толерантности выше, чем для стимуляции иммунного ответа. Можно получить конъюгаты с низкой плотностью эпитопов, обладающие исключительно имму-ногенными свойствами и не способные индуцировать толерантность. С другой стороны, некоторые очень высокозамещенные препараты оказались облигатными толерогенами, не способными индуцировать иммунный ответ. Сходные резуль-таты были получены in vivo и in vitro с конъюгатами полимеризованного фла-геллина, левана, линейного декстрана В512, разветвленного декстрана В1299, SIII и D-GL [95—102].

Было показано, что химическая модификация некоторых антигенов изменяет их иммуногенность и толерогенность — часто в противоположную сторону. Например, ацетоацетилирование мономера флагеллина уменьшает его имму-ногенность для крыс, несмотря на то что препарат все еще сохраняет способность связывать антитела с нормальной аффинностью и остается толерогенным [103J. Денатурация мочевиной овальбумина (ОВА) и антигена Е амброзии приводит к утрате основных антигенных детерминант, взаимодействующих с В-клетками, о чем свидетельствует потеря способности реагировать с сывороточными антителами к соответствующим нативным белкам [104—105]. Тем не менее модифицированные антигены способны активировать хелперные Т-клетки, требующиеся для антительного ответа на нативный антиген, а также индуцировать толерантность у мышей, примированных нативным антигеном. Денатурированный мочевиной антиген подавляет IgE-ответ более эффективно, чем нативный антиген. Аналогичным образом ацетоацетилированный ОВА способен индуцировать специфическое подавление IgE-ответа на ОВА [106].