С момента обнаружения в 1972 г. Шимпл и Веккером [56] «поздно дей-ствующего» ТЗФ считалось, что конечный этап дифференцировки пролифери-рующих В-бластов в иммуноглобулин-секретирующие плазматические клетки протекает под воздействием продуцируемого Т-клетками лимфокина(ов). Однако исследование молекулярных характеристик ТЗФ и механизма его действия на пролиферирующие В-клетки развивались медленно. Заметный интерес к роли лимфокинов в дифференцировке В-лимфоцитов возник в последние годы. Возможность исследования этих молекул была обусловлена появлением более совершенных методов культивирования клеток, успехами в изучении генетических основ образования иммуноглобулинов и перегруппировки генов их тяжелых цепей и, наконец, правильной оценкой полученных ранее данных, в свое время неправильно интерпретированных из-за загрязнения культур Т-клетками.

Поскольку зрелые В-лимфоциты экспрессируют мембранный IgM, очевидно, что перегруппировка генов, необходимая для транскрипции и трансляции мембрано-связанной формы ^i-цепей и легких цепей, уже произошла. Если спра-ведливо предположение о том, что активация В-клеток обусловлена связыванием антигена с антигенсвязывающими участками мембранного IgM, и если активация приводит к экспрессии рецепторов фактора роста В-клеток, тогда ТЗФ или В-клеточные факторы дифференцировки должны контролировать процессы, которые в конце концов приводят к морфологическим изменениям, характерным для плазматических клеток, переключению биосинтеза с мембранной формы pi-цепи на секреторную форму и последующему переключению на биосинтез других классов и подклассов тяжелых цепей. Пока получены только предварительные данные, но похоже, что все эти процессы регулируются семейством близких по свойствам, но все-таки различных факторов дифферент цировки В-клеток (ФДВК, BCDF). 1

В связи с отсутствием доступных антиген-специфических клонированных линий нормальных В-клеток, зависимых от фактора роста, в последнее время исследователи, работающие с ФДВК, обратились к линиям раковых или транс-формированных вирусом Эпштейна — Барр В-клеток как к источнику гомогенных клеток-мишеней для определения ФДВК. Хотя следует соблюдать осторожность при оценке физиологической роли лимфокинов на основании таких экспериментов, в которых клетками-мишенями служат трансформированные лимфоциты, такой подход позволяет избежать сложностей, с которыми приходится сталкиваться при использовании нормальных В-лимфоцитов, часто загрязненных другими типами клеток.

Недавно Пэйдж и др. [75] опубликовали данные о применении раковых клеток для определения ФДВК, функция которых, видимо, заключается в пе-реключении механизма сплайсинга РНК, что необходимо для изменения соот-ношения синтезируемых мембранной и секретируемых jx-цепей. Было показано, что при добавлении супернатантов, полученных от специфических, стимулиро-ванных антигеном клонированных Т-хелперов, к клеткам мышиной линии WEHI-279.1, имеющим на поверхности IgM, в течение 24 ч происходит переключение биосинтеза fi-цепи с мембранной на секреторную форму. Кроме того, за этим переключением следовало увеличение доли IgM-секретирующих клеток. Поскольку величина изменений зависела от количества добавленного супер-натанта, подобная система тестирования пригодна для идентификации и выделения продуцируемого Т-лимфоцитами ФДВК. Следует отметить, что началу активной секреции должен предшествовать посттрансляционный процессинг fi-цепи, который можно проследить по появлению внутриклеточных и-цепей размером 70 кДа. Этот процесс также может зависеть от ФДВК.

В других опытах в качестве клеток-мишеней факторов дифференцировки,, осуществляющих переключение биосинтеза с мембранного на секретируемый IgM, использовались свежевыделенные раковые В-клетки мыши или человека. Айсаксон и др. [76] с помощью пассируемых in vivo клеток BCL^, напоминающих человеческие клетки ХЛЛ, обнаружили, что супернатанты от культур клеток селезенки, стимулированных лектином или аллоантигеном, содержат факторы дифференцировки, вызывающие секрецию IgM. Используя антиидио-типическую антисыворотку к идиотину BCL^-клеток, удалось показать, что именно BCL^-клетки, а не нормальные В-лимфоциты, загрязняющие культуру, являлись мишенями в данной тест-системе. Аналогичные результаты опубликовали Йошидзаки и др. [70], работавшие с человеческим ХЛЛ-клетками, полученными от больного, у которого в сыворотке присутствовал моноклональный IgM. Использованием антиидиотипической антисыворотки для активации ХЛЛ-клеток было обнаружено, что частично очищенная кондиционированная среда, полученная стимуляцией лимфоцитов миндалин лектином, содержала молекулы размером 20 кДа, вызывающие секрецию IgM и небольших количеств IgG, несущих специфический идиотип.

В настоящее время неясно, существует ли только один или несколько различных факторов дифференцировки В-клеток — таким образом, что все этапы дифференцировки в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины, находятся под полным контролем продуцируемых Т-клетками лим-фокинов. Не исключено, что некоторые из сигналов, вызывающих секрецию тяжелой цепи определенного класса, передаются внутриклеточно и не зависят от Т-клеток. Вполне возможно, что по мере прохождения клеткой различных стадий дифференцировки на поверхности появляются рецепторы, специфичные к определенному фактору дифференцировки В-клеток. В этом случае феноти-пические характеристики клеток-мишеней, используемых для тестирования этого фактора, могут определить молекулярные свойства изучаемого ФДВК. Особенно полезными при изучении свойств ФДВК и при проверке предположения о существовании нескольких В-клеточных факторов дифференцировки могут быть трансформированные В-клеточные линии, имеющие определенный фенотип поверхностного иммуноглобулина. Например, Мурагучи и др. [77] показали, что кондиционированная среда от стимулированных лектинами мо-нонуклеарных клеток вызывает у трансформированной вирусом Эпштейна — Барр линии человеческих В-клеток (CESS), имеющих поверхностный IgGT секрецию исключительно IgG. Остается невыясненным, аналогичен ли ФДВК, выявляемый в данной тест-системе, фактору дифференцировки, описанному Пэйджем и др. [75] и вызывающему секрецию IgM у клеток, имеющих поверхностный IgM. В принципе этот вопрос можно было бы решить, поскольку клетки CESS способны абсорбировать из супернатанта молекулы с активностью, обусловливающей секрецию IgG. И в этом случае эксперименты по адсорбции факторов представляют определенный интерес, так как дают основание предполагать, что механизм взаимодействия ФДВК с В-клетками аналогичен взаимодействию IL-2 с IL-2-специфическими рецепторами. Поэтому можно надеяться, что удастся изучить опосредуемую рецепторами специфичность различных ФДВК.
Новые важные данные, полученные с помощью CESS-IgG-системы, недавно опубликовали Кэйда и др. [52]. Было обнаружено, что линия аллоантиген-специфических клонированных хелперных Т-клеток человека продуцирует ФДВК, вызывающий секрецию IgG клетками CESS. Активность, продуцируемая Т-клеточными клонами, была в 1000 раз выше активности ФДВК, содержащейся в супернатанте стимулированных лектином мононуклеарных клеток человека. При гель-фильтрации супернатанта Т-клеточных клонов ФДВК элюировался вместе IL-2 (20 кДа), однако активность ФДВК можно было изби-рательно абсорбировать клетками CESS, в то время как с помощью IL-2-зави-симых цитолитических Т-клеток удавалось абсорбировать IL-2, но не ФДВК. Эти результаты выглядят обнадеживающими, так как клетки CESS дают нам возможность надежно определить рассматриваемый ФДВК, а клонированные Т-клетки способны продуцировать фактор в количествах, достаточных для био-химических исследований.

Недавно были опубликованы данные, указывающие на то, что специфические Т-клетки могут продуцировать В-клеточные дифференцировочные факторы, определяющие, какой класс и субкласс тяжелой цепи будут в конечном итоге экспрессировать В-клетки. Предложено две модели, объясняющие молекулярный механизм переключения биосинтеза В-лимфоцитами. Согласно первой из них, этот процесс является вероятностным, и клетки переключаются на секрецию нового изотипа случайным образом. В таком случае вероятность продуктивной рекомбинации с определенной С-областью зависит от таких параметров, как расстояние от гена С^ или от числа и типа участков, по которым может происходить рекомбинация. Вторая возможность заключается в прямой индукции определенного изотипа факторами дифференцировки, имеющими Т-клеточное происхождение. Данные в пользу специфического переключения изотипа Т-клетками получили Айсаксон и др. [78]. В качестве индикаторных клеток использовались обогащенные нормальные В-лимфоциты мыши, активированные ЛПС. Было показано, что Кон А индуцирует образование Т-клеточ-ной гибридомой и двумя IL-2-зависимыми Т-клеточными линиями факторов, вызывающих преимущественную секрецию IgGj В-клетками, не имеющими поверхностного IgG. Напротив, супернатанты других Т-клеточных гибридом и Т-клеточных клонов либо не содержали ФДВК, либо вызывали секрецию IgM.
Аналогичные, очень убедительные данные, говорящие о регуляции Т-клет-ками экспрессии изотипов В-лимфоцитами, недавно опубликовали Кийоно и др. [79]. Клоны мышиных Т-хелперов, специфичных к бараньим эритроцитам (БЭ), были выведены из лимфоцитов пейеровых бляшек перорально иммунизи-рованных животных. После начального периода культивирования (2—3 недели) в присутствии БЭ и частично очищенного IL-2 методом лимитирующих разведений было получено более 200 клонов, из которых 63 (около 30 %) обладали хел-перной активностью. Двадцать один клон был тщательно изучен: выяснилось, что все эти клоны способствуют образованию значительного числа БОК, секре-тирующих IgA. Независимо от того, были ли В-клетки взяты от примированной или непримированной мыши, Т-хелперные клоны стимулировали образование одного и того же числа IgA БОК. Кроме того, IgA БОК получались как из В-клеток селезенки, так и из В-лимфоцитов пейеровых бляшек. Рассмотренные выше данные свидетельствуют о том, что в случае IgA-ответа центральная роль в экспрессии изотипа принадлежит Т-хелперам, причем ни анатомическая локализация В-клеток, взятых для тестирования, ни их иммунологический статус (примированные, или непримированные) не имеют существенного значения.
Для решения вопроса о существовании изотип-специфических ФДВК в проведенном исследовании заслуживает внимания тот факт, что растворимые факторы, продуцируемые специфическими, стимулированными антигеном клонами Т-хелперов, вызывали преимущественное образование БОК секретирующих IgA. В наше время интенсивно исследуются также Т-клеточные факторы, вызывающие экспрессию IgE [80]. 1