Вскоре после того, как Мишел и Даттон [53] разработали 15 лет назад методы культивирования клеток, с помощью которых можно было получать антителообразующие клетки in vitro, были проведены эксперименты, показавшие, что для развития В-клеточного ответа необходимы Т-лимфоциты [54]. Были сделаны попытки выяснить, каким образом Т-лимфоциты способствуют возникновению антителообразующих клеток. В результате было сделано пред-положение, что Т-клетки можно заменить супернатантами от активированных лектинами (или антигенами) Т-клеток [55]. Поскольку подобные супернатанты действительно обладали способностью заменять Т-лимфоциты, появилась гипо-теза о существовании фактора, заменяющего Т-клетки (ТЗФ, TRF). На основании ранних данных о том, что для оптимального ответа нужно через 48—72 ч. после начала культивирования добавлять содержащий ТЗФ супернатант [56— 59], было высказано предположение, что «поздно действующий» ТЗФ дает сигнал, требующийся для дифференцировки В-бластоз в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины. Значительно меньше внимания уделялось пролиферации В-клеток, следующей за их активацией антигеном. Объяснялось это главным образом тем, что конечный этап практически всех В-клеточных тест-систем включал определение клеток, образующих бляшки (БОК). Кроме того, вследствие недостаточного развития методов удаления макрофагов не была изучена роль макрофагов в В-клеточном ответе.

Еще три года назад в качестве удобного источника препаратов В-лимфоци-тов, не содержащих Т-клеток, использовались спленоциты бестимусной (пи/пи) мыши [58]. Многочисленные исследования показали, что у этих животных отсутствуют зрелые, функционально активные Т-клетки. Поэтому к спленоцитам бестимусной мыши добавляли антиген (гетерологичные эритроциты), кондиционированную среду, содержащую ТЗФ, и через 4—5 дней культивирования подсчитывали число БОК. Следует также отметить, что до последнего времени для получения in vitro антителообразующих клеток (АОК) приходилось культивировать клетки в условиях, весьма далеких от физиологических; плотность спле-ноцитов в культуре была очень высокой (107 клетка/мл), а ответ наблюдался лишь при добавлении некоторых партий сыворотки плода коровы. Главным образом благодаря разработке Исковым и др. [60, 61] среды, не содержащей сыворотки, и появлению метода лимитирующих разведений, позволяющего фиксировать уровень Т-клеточной помощи и число макрофагов, удалось выяснить, что одним из критических параметров является число хелперных Т-клеток: именно это обусловливало необходимость создания высокой плотности клеток и подбора партий сыворотки [62].
Кроме того, было обнаружено, что в спленоцитах бестимусной мыши есть клетки, отвечающие на IL-2 [63] и способные при получении соответствующего активирующего сигнала дифференцироваться в зрелые цитолитические и хел-перные Т-клетки [63, 64]. С установлением этих факторов стало очевидным, что эксперименты, предпринятые для определения активности ТЗФ, могли на самом деле демонстрировать вызываемый IL-2 клональный рост Т-хелперов. На основе этих данных в сочетании с данными о том, что пролиферация и ди-ференцировка Т-клеток контролируются лимфокинами, были разработаны методы, с помощью которых можно было обнаруживать и характеризовать лимфо-кииы, участвующие в В-клеточном иммунном ответе.
Как и при выяснении роли отдельных лимфокинов в Т-клеточном ответе, основная сложность работы с В-клеточными системами состоит в том, что доступ-ные источники лимфокинов (как правило, это кондиционированная среда от стимулированных лектинами лимфоцитов) содержат сложную смесь разнооб-разных молекул. Кроме того, очень непросто получить гомогенную популяцию В-клеток без примесей Т-лимфоцитов, что сделало бы возможным однозначную интерпретацию результатов.