В течение последних двух лет было опубликовано несколько сообщений о том, что В-клеточная пролиферация вызывается фактором роста В-клеток (BCGF). Возможность поддерживать длительную пролиферацию культур чело-веческих [65] и мышиных [66] В-лимфоцитов с помощью кондиционированнойсреды от стимулированных мононуклеарных клеток явилась первым свидетель-ством роли растворимых факторов в пролиферации В-клеток. Как и в случае поддерживаемого кондиционированной средой роста Т-клеток, длительная пролиферация В-лимфоцитов не требует повторного воздействия антигена на иммуноглобулиновые рецепторы. Этот факт убедительно свидетельствует о том, что митоз В-клеток запускается независимым от антигенного стимула сигна-лом(ами). Несмотря на первые обнадеживающие эксперименты, длительно поддерживаемые культуры и клоны В-клеток не получили широкого распро-странения главным образом потому, что не были определены оптимальные усло-вия роста В-лимфоцитов. Кроме того, большинство исследователей столкнулось с проблемой преимущественного роста в культурах Т-клеток, особенно если в качестве источника фактор роста В-клеток применялась кондиционированная среда, содержащая IL-2.

Для того чтобы компенсировать отсутствие стабильных, клонированных линий В-лимфоцитов, в качестве клеток-мишеней при определении фактора роста В-клеток стали использовать высокоочищенные нормальные В-клетки или трансформированные В-клетки. В тест-системе на этот фактор, которую разработали Ховард и др. [67], использовались мышиные спленоциты, из которых были удалены Т-клетки. Удаление Т-клеток проводили обработкой in vivo антитимоцитной сывороткой и последующим комплементзависимым лизисом оставшихся Т-лимфоцитов in vitro в присутствии различных антител к спе-цифическим поверхностным маркерам Т-клеток. Были удалены и прилипающие клетки, так что конечная популяция состояла на 98—99 % из клеток, имевших поверхностные иммуноглобулины. Для определения фактора роста В-клеток их культивировали при относительно низкой концентрации (2,5-105 клетка/мл) с различными разведениями кондиционированной среды, предположительно содержащей данный фактор. В отсутствие активирующих сигналов, затраги-вающих поверхностные иммуноглобулины, пролиферативного ответа на фактор роста В-клеток не наблюдалось. Пролиферация не шла и при стимуляции клеток анти-|х-антителами в отсутствие фактора роста В-клеток. Таким образом, как и Т-лимфоциты, В-клетки необходимо было активировать, прежде чем они приобретали способность отвечать на фактор роста.

Аналогичные данные опубликовали и другие исследователи: Мурагучи и Фауци [68], которые использовали обогащенные В-клетками лимфоциты человека, активированные анти-р,-антителами или стафилококковым белком А; Форд и др. [69], также использовавшие обогащенные В-клетки человека, и Йошидзаки и др. [70], изучавшие трансформированные клетки, полученные от больного с хроническим лимфоцитарньш лейкозом (ХЛЛ). Представляет интерес впервые описанный Фу и др. [71] факт, согласно которому только у тех больных ХЛЛ, в сыворотке которых присутствует моноклональный иммуноглобулин, есть трансформированные клетки, способные отвечать на фактор роста В-клеток. С помощью антиидиотипических антисывороток, а также Fab2- и Fab-фрагментов было показано, что клетки ХЛЛ приобретают способность отвечать на исследуемый фактор только под действием двувалентных антиидиотипических антител [70].

Первые исследования, предпринятые для выяснения роли растворимых факторов в активации, пролиферации и дифференцировке В-клеток, где конечным этапом тестирования было выявление антителообразующих клеток, показали, что в культуре обязательно должен содержаться IL-2 [72]. Эти данные расценили как подтверждение непосредственного воздействия IL-2 на В-клетки, поскольку в начале культивирования бралась высокоочищенная популяция В-лимфоцитов. Однако позднее с помощью Т-клеточных гибридом, продуцирую-
щих только фактор роста В-клеток, IL-2 или фактор дифференцировки В-кле-ток, было обнаружено, что IL-2 не нужен ни для пролиферации В-клеток, ни для их дифференцировки в АОК [73]. Кроме того, абсорбция IL-2 активированными Т-клетками никак не сказывалась на пролиферации В-клеток, в то время как истощение супернатантов активированными анти-р, В-лимфоцитами приводило к исчезновению активности фактора роста В-клеток при сохранении активности фактора роста Т-клеток. Таким образом, было показано, что фактор роста В-клеток и IL-2 представляют собой разные структуры. Помимо этого была продемонстрирована абсорбция фактора роста В-клеток активированными В-лимфоцитами — факт, подтверждающий, что взаимодействие лимфокинов с клетками опосредуется высокоаффинными центрами связывания, которые отличаются очень высокой специфичностью по отношению к определенному лим-фокину. Рассмотренные данные в сочетании с данными о том, что IL-2 проявляет активность в очень низких концентрациях, объясняют полученные ранее результаты, согласно которым IL-2 необходим для развития В-клеточного ответа: IL-2 вызывает рост клонов оставшихся в В-клеточной популяции Т-лимфо-цитов, а те в свою очередь способствуют образованию АОК путем секреции лимфокинов, специфичных к В-клеткам.
Клетки-продуценты фактора роста В-клеток не идентифицированы досто-верно, хотя секреция фактора роста В-клеток тимусными лейкемическими клет-ками мыши [67], Т-клеточными гибридомами человека [73] и клонированными IL-2-зависимыми Т-клетками человека [74] служит веским доводом в пользу его Т-клеточного происхождения. Биохимическое изучение этого фактора еще только началось, но уже первые результаты показали заметное сходство в свойствах человеческого фактора роста В-клеток и IL-2 [74]. По данным гель-фильтрации оба лимфокина имеют мол. массу около 20 к Да. Кроме того, эти две активности не удается разделить хроматофокусированием. Подобное сходство говорит о том, что можно ожидать аминокислотной гомологии между этими двумя ростовыми факторами человека. Напротив, по данным Ховард и др. [67], мышиный фактор роста В-клеток удается отделить от IL-2 гель-фильтрацией: кажущаяся мол. масса фактора роста составляет 16,5—18,5, a IL-2 — 30—35кДа.
Недавно Йошидзаки и др. [74], а также Окада и др. [73] опубликовали дан-ные о существовании двух различных факторов роста В-клеток у человека. Один из них, продуцируемый нормальными клонированными IL-2-зависимыми Т-клетками, по результатам гель-фильтрации имеет мол. массу 50 к Да. При рехроматографии в присутствии 4М мочевины мол. масса уменьшается до 19 кДа. Нормальные периферические мононуклеарные клетки крови при стимуляции ФГА и ФМА секретируют ту же самую молекулу с мол. массой 50 кДа, а также другой лимфокин, который элюируется в объеме, соответствующем 17 кДа. По-видимому, больший интерес, чем гетерогенность по размеру молекулы, представляет тот факт, что действие двух этих факторов на рост В-клеток «инергично. Возможно, данное наблюдение поможет объяснить затруднения, с которыми столкнулось большинство исследователей при попытке поддержать длительный рост В-лимфоцитов. Поэтому дальнейшие работы, направленные на изучение молекулярных свойств В-клеточных факторов роста, механизма их взаимодействия с активированными В-клетками и механизмов, обеспечивающих митоз В-лимфоцитов, открывают возможность широкого изучения и применения антиген-специфических клонов нормальных В-клеток. Такие клетки будут очень полезным инструментом, облегчающим получение гибридом, а также будут использоваться в качестве клеток-мишеней для дальнейшего изучения регуляции и дифференцировки В-лимфоцитов на клеточном, молекулярном и генетическом уровнях.